本站原创摘 要 ：目的 建立高效液相色谱方法测定肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷含量的方法.方法 采用Waters Symmetry-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈-0.02%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为室温.结果 獐牙菜苦苷在0.373 556～2.988 448 μg范围内呈良好的线性关系（r2等于1.000 0）,平均回收率为106.81%,RSD等于3.7%.结论 该方法快捷、准确、简便、重复性好,可用于肝泰舒胶囊的质量控制.
关 键 词 ：肝泰舒胶囊；含量测定；獐牙菜苦苷
肝泰舒胶囊是由獐牙菜、唐古特乌头、节裂角茴香等8味药组成的中药复方制剂,具有清热解毒、疏肝利胆的功效.原标准收载于国家食品药品监督管理局《国家中成药标准汇编》中成药地方标准上升国家标准部分：内科肝胆分册[1],执行标准为WS-10133 （ZD-0133）-2002.其检验项目为薄层色谱扫描法测定齐墩果酸.因齐墩果酸作为含量测定指标,在獐牙菜药材中不具有专属性,故本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对獐牙菜药材中的专属性指标成分獐牙菜苦苷进行研究,以紫外检测器对制剂中獐牙菜苦苷进行含量测定,建立肝泰舒胶囊的质量控制方法.
1.仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪,紫外检测器SK2200HP型超声波振荡仪.
獐牙菜苦苷（批号110785-200203）购自中国食品药品检定研究院.肝泰舒胶囊,青海京珠藏药高新技术产业股份有限公司（批号20111021）提供.乙腈（色谱纯,Burdic&Jackson）,水为Milli-Q超纯水,其他试剂均为分析纯.
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Waters C18（5 m,250 mm×4.6 mm）；以乙腈（A）-0.02%磷酸（B）为流动相进行梯度洗脱（0～21 min,91%B；21～25 min,60%B；25～30 min,60%B）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；进样量：10 L.
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液,备用.
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物,研细,取0.5 g精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,密塞,称定质量,超声处理（500 W,40 kHz）1 h,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜（0.45 m）滤过,取续滤液,即得.
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺獐牙菜肝泰舒胶囊试样（自制）,按“2.2.2”项下方法制备,得阴性对照溶液.结果在獐牙菜苦苷峰对应的保留时间处无干扰.色谱图见图1.
2.3 线性关系考察
精密称取獐牙菜苦苷对照品19.87 mg（含量94.0%）,置25 mL容量瓶中,以甲醇为溶剂,配置系列浓度为37.355 6、74.711 2、149.422 4、224.133 6、298.844 8 μg/mL的獐牙菜苦苷对照品溶液,测定峰面积,以对照品的进样量为横坐标,以对照品的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线.回归方程方程为：Y等于9410.241 2X-4.791 7,r2等于1.000 0,獐牙菜苦苷在0.373 556～2.988 448 μg范围内呈良好的线性关系.
2.4 精密度试验
精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液,连续进样5次,测得峰面积,獐牙菜苦苷峰面积RSD等于1.4%.
2.5 重复性试验
取同一批样品9份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,记录色谱峰的峰面积,计算含量.结果獐牙菜苦苷含量的平均值为每粒7.88 mg,RSD等于1.1%,表明本方法重复性较好.
2.6 稳定性试验
取同一批样品的供试品溶液,置室温下放置,每间隔2 h或4 h测定1次,连续测8次,结果24 h内RSD小于3.0%,表明供试品溶液在24 h内稳定性较好.
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品6份（獐牙菜苦苷20.587 2 mg/g）,每份各约0.25 g.各精密加入对照品溶液5 mL（浓度0.762 904 mg/mL,相当于獐牙菜苦苷对照品3.814 52 mg）,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算加样回收率,结果见表1.
3.讨论
本试验采用HPLC测定肝泰舒胶囊中的獐牙菜苦苷含量,采用紫外检测器,使所测定的成分达到有效的分离.
提取溶剂分别采用甲醇、乙醇及50%乙醇,对獐牙菜苦苷含量的测定结果没有显著差异,但以乙醇及50%甲醇作为溶剂时色谱峰较多,故选用甲醇作为提取溶剂.
分别采用超声、回流两种提取方式,并设定不同的提取时间,对獐牙菜苦苷的含量进行测定,结果表明超声30 min为最佳提取方式.
分别采用甲醇和乙腈作为流动相[2-3]对样品的分离作比较,结果以乙腈-0.02%的磷酸为流动相分离较好,同时,为保证其他成分对检测数据不干扰,以大比例乙腈冲柱.
因中国食品药品检定研究院目前提供的獐牙菜苦苷为鉴别用对照品,在使用之前采用面积归一化法,对其纯度进行测定.本试验根据2010年版《中华人民共和国药典》（一部）标准研究课题任务书的要求,增加了肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷的含量,可以更全面地控制产品的质量,保证临床用药的安全有效.
从含量测定结果可以看出,随着生产日期的变化,獐牙菜苦苷的含量随放置时间的延长呈明显的降低趋势.