本站原创[摘 要 ] 目的 对余甘子及其代用品栀子进行鉴别. 方法 通过性状、显微特征、薄层色谱和理化鉴别等方面对余甘子及栀子进行鉴别. 结果 余甘子和栀子在外形、大小、颜色、表面特征上有很明显的不同；栀子的显微特征中有不定式气孔和非腺毛,余甘子中没有,余甘子中有很多不同形态的石细胞；余甘子和栀子在相同的位置没有出现相同的点. 结论 可以从性状、显微、薄层等方面来鉴定余甘子和栀子.
[关 键 词 ] 余甘子；栀子；生药鉴别
[中图分类号] R282.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）11（a）-0077-05
The pharmacognostica identification of Phyllanthi fructus and its substitute Gardeniae fructus
WEI Meimei1 HE Jiang2 YANG Weijun2 XUE Guipeng2 XU Lei2
1.Food Science and Pharmaceutical Academy, Xinjiang Agricultural University, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830052, China； 2.Key Laboratory of Xinjiang Uighur Medicine, Xinjiang Institute of Materia Medica, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830004, China
[Abstract] Objective To discriminate Phyllanthi fructus and its substitute Gardeniae fuctus. Methods Phyllanthi fructus and its substitute Gardeniae fructus were identied by traits, microscopic characteristics （thin layer chromatography） TLC and physical and chemical, etc. Results Phyllanthi fructus and Gardeniae fructus were obviously different in shape, size, color and surface characteristics. Gardeniae fructus had infinitive pores and non-glandular hairs, there was no in Phyllanthi fructus, there were many different forms of stone cells in Phyllanthi fructus. Phyllanthi fructus and Gardeniae fructus didn′t he the same point in the same position. Conclusion It can discriminate Phyllanthi fructus and Gardeniae fructus from properties, microscopic characteristics and TLC.
[Key words] Phyllanthi fructus； Gardeniae fructus； Pharmacognostica identification
民族药余甘子Phyllanthi fructus来源于大戟科叶下珠属余甘子Phyllanthus emblica L.的果实.主要分布于印度、中国及Massanene 群岛,以中国的产量最多[1-3].为藏医、维医、蒙医、傣医等习用[4-6].维吾尔医中余甘子二级干一级寒[7],味甘、酸、涩[8],主治全身虚弱、湿热性或血液质疾病,清热利咽、安神补心、润肺止咳、收敛止泻、开胃进食等,药理作用有降脂、抗炎等[9-12].栀子Gardeniae fructus来源于茜草科植物栀子Gardenia jainoides Ellis的干燥成熟果实,维医认为其性寒味苦,归心肝肺胃三焦经,主治热病虚烦、凉血止血、清热泻火、除烦利尿、利胆祛湿等,用于伤寒热病、肝郁化火、肺热湿热、补肾、降压、降血糖、抗病毒、抗炎等[12-13].
因余甘子和栀子都性寒、功能主治相似,一些民医常将二者相互代替,用于湿热病、肝胆肾虚、安神祛烦、降脂降压等.但为了准确用药,确保疗效,本实验对二者进行鉴别研究.
1仪器与试药
1.1 仪器
KQ5200B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）,ZF-20D型暗箱式紫外分析仪（巩义市予华仪器有限责任公司）,JMC1000型天平（余姚纪铭称重校验设备有限公司）,BS124S型电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）,OLYMPUS CX31型照相显微镜（日本奥林巴斯公司）,BM1100141型偏光显微镜（上海彼爱姆光学仪器有限公司）,TS-12D型生物组织自动脱水机（湖北孝感宏业医用仪器有限公司）,YT-6B生物组织摊拷片机（湖北孝感亚光医用电子技术研究所）,BM-Ⅶ型生物组织包埋（孝感市宏业医用仪器有限公司）,BM-Ⅶ型冷冻台（孝感市宏业医用仪器有限公司）,DHG-9070A型鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）.
1.2 药品与试剂
乙醇（天津市致远化学试剂有限公司,批号：2012 0306）；乙酸乙酯（天津市登科研究化学试剂有限公司,批号：20120204）；甲醇（天津市福晨化学试剂厂,批号：20130307）；甲酸（天津市登科研究化学试剂有限公司,批号：20120222）；丙三醇（天津市致远化学试剂有限公司,批号：20130918）；三氯甲烷（天津市风船化学试剂科技有限公司,批号：20131105）；硫酸（天津市风船化学试剂科技有限公司 批号：20130218）；（天津市光复精细化工研究所,批号：20070607）；苏丹Ⅲ（天津市天新精细化工开发中心,批号：20040326）；水合氯醛（天津市福晨化学试剂厂,批号：20121017）；盐酸（天津市风船化学试剂科技有限公司,批号：20130913）；石油醚（天津市永晟精细化工有限公司,批号：20101202）.硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂,批号：20071210）；聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂出品,批号：20100904）. 1.3 药材
药材余甘子于2014年2月购自乌鲁木齐,产地云南,编号20140212.栀子购自乌鲁木齐济康药房,产地山东,编号20140214.经新疆维吾尔自治区药物研究所何江副研究员鉴定为来源于大戟科叶下珠属余甘子Phyllanthus emblical L.的干燥成熟果实和茜草科植物栀子Gardenia jainoides Ellis的干燥成熟果实.
2.方法与结果
2.1 性状鉴别
2.1.1 栀子 长卵形或椭圆形,长1.5～3.5 cm,直径1.0～1.5 cm,表面红、棕红色或褐色,表面深褐色,6条翅状纵枝,楞间常有1条明显的纵脉纹,有分枝.顶端残存萼片,基部稍尖,有残留果梗,果皮薄而脆,略有光泽,内表面色较浅,有光泽.2～3条隆起的锥子隔膜,种子多散,扁卵圆形,集结成团,深红色或红,表面密具细小疣状突起.气微,味微酸而苦.见图1.
图1 栀子的外观形状（完整药材,编号20140214）
2.1.2 余甘子 本品呈球形或扁球形,直径1.2～2.0 cm.表面棕褐色或墨绿色,有浅颗粒状突起,具皱纹及不明显的6棱,果梗长约1 mm.外果皮厚1～4 mm,质硬而脆.内果皮黄白色,硬核样,表面略具6棱,背缝线的偏上部有数条筋脉纹,干后可裂成6瓣,种子6颗,近三棱形,棕色.气微,味酸涩,回甜.见图2.
图2 余甘子的外观形状（完整药材,编号20140212）
2.2 显微鉴别
2.2.1 栀子果皮横切面 圆形,纵楞处显著凸起,外果皮为一系列长方形细胞,外壁增厚,中果皮外侧有2～4列厚角细胞,向内为大量长圆形薄壁细胞,含色素,少数细胞中含有草酸钙簇晶,外韧性维管束稀疏分布,较大的维管束四周具木化的纤维束,并有石细胞夹杂期间,内果皮为2～3列石细胞,近长方形、方形或多角形,壁厚,孔沟清晰,有的胞腔内可见草酸钙方晶.见图3.
1.外果皮；2.果棱；3.纤维束及导管；4.薄壁细胞
图3 栀子果皮显微横切面（10×）
2.2.2 余甘子果皮横切面 外果皮由胞壁增厚的多角形细胞2～7列组成,细胞直径8～20 μm,中果皮较广厚,为薄壁细胞所组成,有维管束通过,薄壁细胞直径32～65 μm,细胞内常有草酸钙簇晶和方晶,内果皮为多列较小的石细胞所组成,胞腔明显,层纹不甚清楚.见图4.
1.外果皮；2.纤维束及导管；3.中果皮；4.内果皮
图4 余甘子果皮显微横切面（4×）
2.2.3 栀子粉末特征 本品粉末红棕色.内果皮石细胞类长方形、类圆形或类三角形,常上下层交错排列或与纤维连结,直径13.2～28.8 μm,长约65.46 μm,壁厚4.4～12.3 μm；胞腔内常含草酸钙方晶.内果皮纤维细长,梭形,直径4.0～18.5 μm,长52.0～168.2 μm,常交错、斜向镶嵌状排列.种皮石细胞或淡棕色,长多角形、长方形或形状不规则,直径34.4～131.3 μm,长80.6～277.7 μm,壁厚8.4～37.5 μm,纹孔甚大,胞腔棕红色.草酸钙簇晶直径13.2～38.2 μm.螺纹导管成束,直径4.3～16.7 μm,果棱纤维成束,直径4.1～21.2 μm,气孔不定式,直径18.4～39.3 μm,非腺毛直径40.9～141.1 μm.见图5.
1.簇晶；2.非腺毛；3.导管及果棱纤维；4.内果皮石细胞、内果皮纤维；5.种皮石细胞；6.不定式气孔
图5 栀子粉末特征（40×）
2.2.4 余甘子粉末特征 本品粉末呈棕褐色.果皮石细胞众多,呈长卵形、多角形和不规则形,胞腔大,壁孔明显,内果皮石细胞直径34.1～98.4 μm,长73.6～272.0 μm,壁厚4.4～26.1 μm.外果皮石细胞直径26.9～177.0 μm,长71.1～339.8 μm,壁厚4.2～24.5 μm.种皮石细胞直径26.1～106.6 μm,长51.6～227.1 μm,壁厚3.7～18.9 μm.草酸钙簇晶直径8.4～42.4 μm,螺纹导管成束,直径4.6～17.7 μm,外果皮纤维成束,直径2.9～20.6 μm,薄壁细胞直径22.6～199.4 μm,长29.9～223.8 μm.栀子和余甘子中都有的显微特征有：簇晶、螺纹导管、果皮石细胞、种皮石细胞、果皮纤维.不定式气孔和非腺毛是在栀子中发现,余甘子中没有；本实验在余甘子中发现了多种不同形态的石细胞：厚壁、椭圆形,薄壁、长卵形,薄壁、不规则形,余甘子中石细胞较栀子中大,部分石细胞内部有特殊结构.见图6.
1.薄壁细胞；2.种皮石细胞；3.内果皮石细胞；4.种皮石细胞；5.外果皮石细胞；6、7.纤维束；8.簇晶
图6 余甘子粉末特征（40×）
2.3 薄层色谱鉴别
方法一：取栀子粉末1 g,加50%甲醇10 mL,超声处理（200 W,40 kHz）40 min,过滤,取滤液作为供试品溶液.另取栀子对照药材粉末1 g,同法制成对照《中国药典》的补量写法,可做例外药材溶液.再取栀子苷对照品适量,加95%乙醇制成每1 mL含4 mg的溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法[14]试验,吸取上述3种溶液各2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）为展开剂,展开,取出,晾干.供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液,在110℃加热至斑点显色清晰.余甘子用栀子的方法处理.结果栀子、栀子苷和栀子对照药材在同一位置出现亮点,余甘子没有.见图7.
方法二：取余甘子样品粉末0.5 g.加乙醇25 mL,超声处理（200 W,40 kHz）30 min,滤过,取滤液.另取余甘子对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液.另取没食子酸对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液.照薄层色谱法[15]试验,吸取上述3种溶液各2～4 μL,条带状点样,条带宽度为8 mm,条带间距为5 mm,原点距底边为8 mm,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸（3∶1）为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰,可见光下检视.供试品色谱中,余甘子样品在与没食子酸、对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,栀子没有.见图8. 1～3：栀子；4～6：余甘子；7：余甘子对照药材；8：没食子酸
图8 余甘子薄层色谱图
两种方法都可以鉴别余甘子和栀子两种药材,第二种方法结果更明显,各种成分被分离的更有层次,效果更加明显.
2.4 理化鉴别
2.4.1 番红花素检验一 取栀子、余甘子粉末2 g,加水5 mL,置水浴中加热3 min,滤过.取滤液5滴,置瓷蒸发皿中,烘干后,加硫酸1滴[16-17].栀子样品即显蓝绿色,迅速变为黑褐色,继转为紫褐色.余甘子样品则由无色变为黄褐色,最后变为灰褐色.证明栀子中含有番红花素,而余甘子中没有.
2.4.2 番红花素检验二 栀子、余甘子1%热水浸出液,滤过.取滤液10 mL,置有塞量简中,加5 mL,振摇[18].番红花素不溶于无水.两者均出现分层现象,栀子样品水层呈亮,醚层无色,余甘子样品水层呈黄褐色,醚层无色.该方法无法鉴别两种中是否有番红花素.
2.4.3 酚类物质检验 称取余甘子、栀子粉末10 g,加入60%（V/V）乙醇溶液200 mL,在50℃下水浴振荡提取3 h,过滤,滤渣重复上述步骤5次,合并6次提取的滤液,挥去乙醇[19].本实验在操作时,成比例地减少了样品量和乙醇的量,以避免浪费,同时减少工作量.取溶液1 mL,加三氯化铁1～2滴.余甘子样品呈现蓝、暗绿、蓝紫色,栀子样品则呈黄褐色.结果显示余甘子中含有酚类物质,而栀子中没有.
3.讨论
本研究在栀子中发现了大量的非腺毛和不定式气孔,这是在余甘子中没有发现的.较《维吾尔药志》（上）[12]的研究结果来讲,本实验发现了大量的气孔和非腺毛,较《中国中药材薄层色谱彩集》[15]的鉴别实验来讲,本研究发现了螺纹导管、不定式气孔和果棱纤维这几种结构,这是一个很容易区分两者的显微特征；余甘子中有大量不同的石细胞：厚壁、椭圆形,薄壁、长卵形,薄壁、不规则形,并且余甘子中石细胞比栀子中的石细胞大很多,有的石细胞内部有特殊结构,如图6中4所示.与已有余甘子的显微特征研究,如《维吾尔药志》（上）[12]、2010年版《中国药典》[14]和李仪儒[21]等比较,本研究发现了螺纹导管这一结构.
从薄层实验中,栀子、余甘子的薄层特征很明显.理化检验的番红花素检验一中,余甘子和栀子的颜色反应不同,可以证明余甘子中没有番红花素,栀子中有；番红花素检验二中,两者均分层,可能余甘子中含有不溶于无水的物质,无法说明余甘子中是否含有番红花素,所以该方法不适用于鉴别两者；酚类物质中,根据反应证明余甘子中含有酚类物质,栀子中不含有.付红蕾等[22]和贺文浩等[23]均提到栀子中含有酚类物质.可能是栀子中酚类物质含量较低,也可能是栀子溶液的颜色遮盖了颜色反应.
在维吾尔医、藏医中栀子是余甘子的代用品.栀子与余甘子在性状外观上很容易辨别.而栀子和余甘子粉碎后的粉末从颜色、气味等不好区分.本实验从性状、显微、横切、薄层和理化鉴别等几个方面来研究,较易区分余甘子和栀子[24-27].
综上所述,本实验测定的指标效果明显,操作简单,适用于余甘子和栀子的快速鉴别.
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（收稿日期：2014-07-15 本文编辑：卫 轲）