本站原创【摘 要 】目的:测定四批藏药榜嘎中的阿替新、异叶乌头碱含量.方法:采用HPLC法,用DiamonsilC18柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脱,流速1ml/min,柱温30℃,检测波长230nm.结果:在1µ,g～5µ,g间,阿替新与异叶乌头碱均呈良好的线性关系,平均回收率为99.238%,RSD值1.477%.结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于藏药榜嘎中阿替新、异叶乌头碱的含量测定.
【关 键 词 】榜嘎,阿替新,异叶乌头碱,HPLC
【中图分类号】R29【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-188-2
榜嘎是常用藏药,为毛茛科植物船盔乌头Aconitum niculare(Brahl.)Stapf及甘青乌头Aconitum tanguticum(Maxim.)的全草.主要分布于西藏南部,陕西秦岭、甘肃南部、青海东部、四川西部,云南北部等地也有出产.功效清热解毒利湿,主治肝炎、胆囊炎、肺炎、感冒发热、咽喉炎、胃肠炎等.榜嘎主要含有生物碱类成分,本研究测定了其中的阿替新、异叶乌头碱含量.
1实验部分
1.1仪器、试药和药品
Thermo高效液相色谱仪(Finigan公司),PDA检测器,甲醇为色谱纯,水为高纯水,其他试剂均为分析纯,阿替新、异叶乌头碱对照品由SIGMA公司提供.榜嘎药材四批,分别购自四川省阿坝州马尔康、红原、黑水及阿坝四县.
1.2色谱条件[1]和系统适用性试验
(A)
(B)
(C)
图1.阿替新和异叶乌头碱对照品溶液色谱图(A),榜嘎样品溶液色谱图(B),和空白溶液色谱图(C),(1.阿替新,2.异叶乌头碱)
用Diamonsil C18柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脱,流速1ml/min,柱温30℃,检测波长230nm,按阿替新计,色谱柱理论塔板数不低于6×103,阿替新峰和异叶乌头碱峰与其他峰达到基线分离,峰形对称.色谱图见图1.
1.3溶液的制备
1.3.1对照品溶液的制备精密称取阿替新、异叶乌头碱适量,加二氯甲烷制成浓度为1mg/ml的溶液,精密吸取1ml,置于尖底具塞试管中,精密加入0.01mol/l硫酸溶液1ml,涡旋2min,离心5min,取上清液,即得.
1.3.2样品溶液的制备取粉末10g,加入25%氨水6ml润湿,再加入50ml,放置过夜,过滤,药渣用洗涤三次,每次15ml,合并液,在60℃以下挥干,残渣用二氯甲烷溶解并定量转移至5ml容量瓶中.色谱检测前按1.3.1处理此溶液并进样.
1.4方法学考察
1.4.1线性范围精密吸取上述阿替新和异叶乌头碱对照品溶液2、4、6、8、10µ,l注入液相色谱仪,观察色谱图,记录其峰面积,并以峰面积A为纵坐标,进样量C(µ,g)为横坐标,进行回归,阿替新进样量在1µ,g～5µ,g间线性关系良好,A等于38345C-1354.1(r等于0.9999),异叶乌头碱进样量在1µ,g～5µ,g间线性关系良好,A等于32069C-39.6(r等于0.9999).
1.4.2精密度试验精密吸取阿替新对照品溶液5µ,l,连续进样6次,阿替新峰面积的RSD为0.21%,表明仪器精密度良好.
1.4.3重复性试验取榜嘎粉末5份,分别按1.3.2项下方法制成样品溶液,以1.2项下色谱条件,精密吸取5µ,l注入液相色谱仪,记录峰面积,计算阿替新含量,结果阿替新平均含量0.106%,RSD为1.45%,表明该方法重复性良好.
1.4.4稳定性试验取样品溶液,分别在0、1、2、4、6、8小时,精密吸取5µ,l注入液相色谱仪,记录峰面积,结果RSD为1.73%,表明样品溶液在8小时内稳定.
1.4.5加样回收率试验称取已知含量的榜嘎粉末5份,每份约0.1g,精密称定,分别加入一定量的对照品,按上述重
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复性方法测定阿替新含量,计算加样回收率,结果见表1.
1.5样品测定
按1.3.2项下方法制备样品溶液后,按上述重复性项下方法测定阿替新、异叶乌头碱含量,结果见表2.
2讨论与结论
由于关于阿替新与异叶乌头碱的研究较少,缺少参考文献,本实验参照其同属植物乌头的主要成分乌头碱的样品处理方法及色谱条件[1,2],得到了较好的提取率和色谱分离.紫外光谱吸收图中显示该两种化合物的最大吸收均接近230nm,故选择230nm为检测波长.测量结果表明,不同产地的榜嘎药材中阿替新与异叶乌头碱含量差别不大.榜嘎药材化学成分和含量测定的研究较少,由于资源有限,本实验只测定了其中的两种成分,建议今后加强该方面研究.